Prácticas recomendadas: cuidado de las columnas de cromatografía

Una columna es el corazón de cualquier separación cromatográfica. Cuidar bien esa columna ayudará a garantizar que su inversión tenga la vida útil más larga posible y que esté lista para sus muestras. No es difícil asegurarse de que sus columnas LC y SFC se utilicen, almacenen y limpien correctamente, pero los errores pueden resultar costosos.

Sus columnas de fase reversa, fase normal, quiral y SFC necesitan cierto cuidado en varias fases del ciclo de vida, incluida la instalación, el almacenamiento y la limpieza.

Aquí hay algunos consejos simples para ayudarlo a mantener sus columnas en óptimas condiciones para maximizar el valor y la vida útil de estos elementos críticos.

Consideraciones de la fase móvil para todos los tipos de columnas:

  • Use solo productos químicos y reactivos de la más alta calidad/pureza
  • Desgasifique y filtre todas las fases móviles antes de su uso
  • Las trazas de impurezas presentes en las fases móviles o los aditivos pueden degradar drásticamente las columnas
  • Al cambiar a una fase móvil diferente, asegúrese de que los solventes y los tampones sean miscibles
  • El uso de disolventes que no son miscibles con el disolvente de la columna puede dañar la columna de forma permanente. La precipitación de sal y tampón de la fase móvil puede dañar permanentemente la columna
  • Compruebe siempre la solubilidad de la muestra y, si es posible, utilice la composición inicial de la fase móvil como diluyente de la muestra (disolvente)

Columnas de fase inversa

  • Instalación:
    • Enjuague bien las bombas y líneas de HPLC con fase móvil filtrada y desgasificada (sin soluciones tampón). Asegúrese de que no haya burbujas de aire en el sistema.
    • Conecte la columna al inyector correspondiente a la dirección de la etiqueta de flujo (ubicada en la columna). Deje la salida de la columna sin unir.
    • Configure la bomba para que fluya a 0,1 ml/min (o la configuración más baja) y aumente a su índice de flujo operativo típico durante al menos 5 minutos
    • Detenga el flujo cuando haya un flujo libre de solvente desde la salida de la columna. Limpie el extremo de la columna con una toallita técnica sin pelusa y conéctela al detector
    • Equilibre la columna pasando aproximadamente de 10 a 30 volúmenes de columna de fase móvil a su caudal operativo a través de la columna
    • Evite los cambios bruscos de presión
  • Almacenamiento:
    • ¡Nota! Las condiciones de almacenamiento afectan la vida útil de las columnas
    • Nunca almacene columnas llenas de tampones que contengan fase móvil
    • Enjuague con 5 volúmenes de columna de una fase móvil sin tampones para eliminar los tampones o las sales
    • Almacene la columna en 65 % de acetonitrilo/35 % de agua
  • Limpieza (si se observa una alta contrapresión):
    • Enjuague con 10 volúmenes de columna cada uno de:
      • 95 % agua/5 % acetonitrilo (para la eliminación de tampones)
      • THF
      • 95 % agua/5 % acetonitrilo
      • Fase móvil
      • Si usa una columna PKI Epic LC, puede invertir el lavado de la columna si aún se observa una alta contrapresión.

Columnas de fase normal

  • Instalación:
    • Enjuague bien las bombas y líneas de HPLC con fase móvil filtrada y desgasificada (sin soluciones tampón). Asegúrese de que no haya burbujas de aire en el sistema.
    • Conecte la columna al inyector correspondiente a la dirección de la etiqueta de flujo (ubicada en la columna). Deje la salida de la columna sin unir.
    • Configure la bomba para que fluya a 0,1 ml/min (o la configuración más baja) y aumente a su índice de flujo operativo típico durante al menos 5 minutos
    • Detenga el flujo cuando haya un flujo libre de solvente desde la salida de la columna. Limpie el extremo de la columna con una toallita técnica sin pelusa y conéctela al detector
    • Equilibre la columna pasando aproximadamente de 10 a 30 volúmenes de columna de fase móvil a su caudal operativo a través de la columna
    • Evite los cambios bruscos de presión
  • Almacenamiento:
    • ¡Nota! Las condiciones de almacenamiento afectan la vida útil de las columnas
    • Nunca almacene columnas llenas de tampones que contengan fase móvil
    • Enjuague con 5 volúmenes de columna de una fase móvil sin tampones para eliminar los tampones o las sales
    • Guarde la columna en hexano al 100 %
  • Limpieza:
    • Le recomendamos que se comunique con nuestra asistencia técnica de columnas LC al +1-800-356-6140 si está interesado en limpiar su columna de fase normal

Columnas de fluido supercrítico (SFC)

  • Instalación:
    • Enjuague bien las bombas y líneas de HPLC con fase móvil filtrada y desgasificada (sin soluciones tampón). Asegúrese de que no haya burbujas de aire en el sistema.
    • Conecte la columna al inyector correspondiente a la dirección de la etiqueta de flujo (ubicada en la columna). Deje la salida de la columna sin unir.
    • Configure la bomba para que fluya a 0,1 ml/min (o la configuración más baja) y aumente a su índice de flujo operativo típico durante al menos 5 minutos
    • Detenga el flujo cuando haya un flujo libre de solvente desde la salida de la columna. Limpie el extremo de la columna con una toallita técnica sin pelusa y conéctela al detector
    • Equilibre la columna pasando aproximadamente de 10 a 30 volúmenes de columna de fase móvil a su caudal operativo a través de la columna
    • Evite los cambios bruscos de presión
  • Almacenamiento:
    • ¡Nota! Las condiciones de almacenamiento afectan la vida útil de las columnas
    • Nunca almacene columnas llenas de tampones que contengan fase móvil
    • Enjuague con 5 volúmenes de columna de una fase móvil sin tampones para eliminar los tampones o las sales
    • Almacenar la columna en etanol al 100 %
  • Limpieza:
    • Le recomendamos que se comunique con nuestra asistencia técnica de columnas LC al +1-800-356-6140 si está interesado en limpiar su columna de fluido supercrítico.

Columnas quirales

¡NOTA! Los disolventes residuales que quedan en los sistemas de HPLC o SFC (p. ej., acetona, cloroformo, acetato de etilo, DMF, DMSO, diclorometano, THF y agua) destruirán una columna quiral . Por lo tanto, asegúrese de enjuagar el sistema con IPA o etanol antes de conectar una columna quiral.

  • Parámetros de instalación y uso:
    • ¡NOTA! Si la columna quiral se va a utilizar para cromatografía de fluidos supercríticos (SFC), enjuague bien con etanol al 100 % antes de usarla.
    • Dirección del flujo: la dirección del flujo para las columnas quirales suele estar indicada por una flecha en la etiqueta de la columna
    • Tasa de flujo y presión: para maximizar la vida útil de la columna, las tasas de flujo deben ajustarse para que la contrapresión no supere los 6300 psi (≈ 450 bar)
    • Rango de temperatura: 0 – 40 ◦C
    • Fase móvil: las fases móviles típicas incluyen hexano/IPA y hexano/etanol. Todas las muestras y fases móviles deben filtrarse a través de un filtro de membrana.
    • Modificadores: si es necesario, se pueden usar DEA, TEA, TFA y ácido acético para mejorar la forma de los picos de compuestos altamente básicos o ácidos. ¡Nota! Los modificadores causarán un efecto de memoria en la columna.
  • Almacenamiento:
    • Las columnas deben enjuagarse y almacenarse en hexano al 90 %/IPA al 10 % con los tapones de los extremos asegurados a cada extremo de la columna.

Seguir estas pautas ayudará a garantizar que sus columnas LC y SFC estén listas para su primera separación y para muchas más después de eso. Las muestras a veces pueden ser lo suficientemente duras en una columna, nadie necesita problemas adicionales. Estos pasos lo ayudarán a prepararse para obtener resultados confiables.

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